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组培灌装机(培养基自动灌装机)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-04 09:24   点击:233  编辑:admin   手机版

1. 培养基自动灌装机

培养基配制程序如下:

  1. 将贮存的各种母液按顺序依次放好。

  2. 将各种洁净的玻璃器皿如培养瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、漏斗等,放在指定的位置。准备好蒸馏水或无离子水及瓶盖或封口膜、包纸、橡皮筋等。

  3. 称取规定量的琼脂和蔗糖,将琼脂置于精钢锅或者电饭煲中,加水至培养基最终容积的3/4或1/2,随之加热使之溶解,注意防止煳锅底和溢出。琼脂必须完全溶化,以免造成浓度不均。

  琼脂不能过多,不然会导致培养基太硬,含水太少,通气不良;反之,培养基太软,植物材料则难以固定。由于琼脂较难溶解,所以在制备培养基时,应首先加热溶解。

  4. 按母液顺序,根据不同母液的浓缩倍数移取规定的量,如配制1L MS培养基移取浓缩10倍的大量元素母液为100mL。母液加完后,再经过计算加入所需要的植物生长调节剂。

  在加入母液或生长调节剂时,应事先检查这些药品是否已经变色或产生沉淀,若出现这些现象就停止使用。加完后一并倒入已溶化的琼脂中,并再加入蔗糖。

  5. 加蒸馏水定容至培养基的最终容积。

  6. pH值调整。培养基的pH值(酸碱度)直接影响培养物对离子的吸收,所以过酸或过碱都会影响植物的生长。此外,琼脂培养基的pH值还影响到其凝固程度,所以当培养基配制好以后,应随即进行pH值的调整(一般pH值为5.6-6.0)。

  最好是用酸度计测试,即快又准,如无此设备也可以用精密pH试纸(应在干燥容器中保存,以免吸潮而失效)。若培养基偏酸就用1mol/L的氢氧化钠来调节,偏碱则用1mol/L的盐酸来调节。

  经高压蒸汽灭菌后,由于某些成分的分解(如蔗糖)或氧化,使培养基的pH值会降低(一般会降低0.2左右)。有时玻璃皿质量较差,其中一部分物质溶解,也会影响酸度的变化,这些再调整培养基的pH值的时候都要考虑进去。

  一般在比较成熟的情况下,会在培养基高压蒸汽灭菌前调高一定的pH值,以便适应灭菌后pH值下降的问题,具体调高多少可根据自身实验摸索。

  7. 培养基的分装。琼脂约在40℃以下时凝固,因此配制好的培养基要趁热分装,分装时一般用烧杯、漏斗直接精选分注。若条件允许,用培养基灌装机来分注会更加方便。

  分装时要掌握好分注量,多了即浪费又减小培养物的生长空间;少了又会因营养不足而影响生长,一般以占培养容器1/4 - 1/3左右为宜,培养基在培养容器中的厚度约为1.5cm。

  分装时要注意不要将培养基沾到管壁上,以免引起污染。分装后立即塞上棉塞或者盖上瓶盖或封好封口膜,并在培养瓶上贴标签或用记号笔在瓶壁上作好标注,然后进行灭菌。

2. 培养基模拟灌装批量

酵母菌的培养和观察 实验前的思考 人类认识和利用酵母菌的历史悠久,早在史前时期,先人们就学会酿酒。约在6000年前,就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜,人们才窥探到醉母菌的真面目。对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯,他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌 目的要求 认识酵母菌的形态结构和出芽生殖。 酵母菌的利用。 材料用具 酵母菌培养液,显微镜,解剖针,载玻片,盖玻片,吸管,镊子,稀释的碘酒,吸水纸(或白纸),放大镜,纱布。

方法步骤 一 酵母菌的利用 1查阅酵母菌的利用相关资料:属真菌。体呈圆形、卵形或椭圆形,内有细胞核、液泡和颗粒体物质。通常以出芽繁殖;有的能进行二等分分裂;有的种类能产生子囊孢子。广泛分布于自然界... 酵母菌的培养和观察 实验前的思考 人类认识和利用酵母菌的历史悠久,早在史前时期,先人们就学会酿酒。约在6000年前,就发明发面的方法。直到十九世纪有了显微镜,人们才窥探到醉母菌的真面目。

对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯,他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌 目的要求 认识酵母菌的形态结构和出芽生殖。 酵母菌的利用。

材料用具 酵母菌培养液,显微镜,解剖针,载玻片,盖玻片,吸管,镊子,稀释的碘酒,吸水纸(或白纸),放大镜,纱布。

方法步骤 一 酵母菌的利用 1查阅酵母菌的利用相关资料:属真菌。体呈圆形、卵形或椭圆形,内有细胞核、液泡和颗粒体物质。通常以出芽繁殖;有的能进行二等分分裂;有的种类能产生子囊孢子。广泛分布于自然界,尤其在葡萄及其他各种果品和蔬菜上更多。是重要的发酵素,能分解碳水化合物产生酒精和二氧化碳等。生产上常用的有面包酵母、饲料酵母、酒精酵母和葡萄酒酵母等。有些能合成纤维素供医药使用,也有用于石油发酵的。啤酒酵母属酵母菌属。细胞呈圆形、卵形或椭圆形。以出芽繁殖,能形成子囊孢子。在发酵工业上,可用来发酵生产酒精或药用酵母,也可通过菌体的综合利用提取凝血质、麦角固醇、卵磷脂、辅酶甲与细胞色素丙等产品。 2联系实际,参观沙湾啤酒厂,获得酵母菌,麦芽,带回准备试验 二、观察酵母菌 1.取一滴酵母菌培养液,制成临时装片。用显微镜观察酵母菌的形态和颜色。

2.用稀释的碘酒染色,观察酵母菌的细胞壁、细胞核、细胞质和液泡。

3.画一个正在进行出芽生殖的酵母菌,注出芽体。 三 酵母菌的扩培 3 菌种和培养基 3.1 菌种:啤酒酵母 3.2 培养基 3.2.1 酵母斜面培养基 10°麦芽汁固体斜面,pH5.0 3.2.2 酵母摇瓶种子培养基 10°麦芽汁,pH5.0或葡萄糖10%,玉米浆1%,尿素O.2%,pH5.0。 3.2.3 酵母分批发酵培养基 玉米粉经液化、糖化,折合葡萄糖浓度为10%,玉米浆1%,硫酸铵0.4%,pH5.5。 3.2.4酵母分批补料发酵培养基(学生讨论提出) 4 实验仪器、设备 (1)5升发酵罐;

(2)摇瓶机或手摇;

(3)超净工作台;

(4)离心机 (5)显微镜 (6)分光光度计 (7)三角瓶。 5 实验过程 5.1 分批培养 5.1.1 总流程 斜面培养 斜面培养基配制与灭菌,接种,培养 ↓ 所需仪器物品:灭菌锅,试管,棉塞,培养基原料,培养箱 摇瓶种子 300毫升种子液,500ml三角瓶三只。装液100ml,培养基,培养摇瓶,纱布。 ↓ 上罐培养 (双酶制糖)糖化液稀释至l0%浓度,添加辅料,灭菌,接种。 ↓ 菌体分离 离心机或板框过滤器 5.1.2 斜面种子制备 自保藏斜面中挑取一环酵母菌体接入新鲜的斜面试管中,于28℃培养箱中培养24h。 5.1.3 摇瓶种子的制备 将上述培养好的斜面种子接入500ml三角瓶装的灭过菌的100ml摇瓶种子培养基中,在28℃,200rpm震荡培养15-20h。 5.1.4 发酵罐培养 5升发酵罐装入2升发酵培养基,121℃灭菌20min,冷却至30℃,将培养好的摇瓶种子接入发酵罐(接种量2~3%)进行发酵。发酵条件为:温度28℃, 5.1.5 过程监控 0小时:取样测定总糖和还原糖; 4~24小时:每隔4小时取样镜检、、菌体浓度; 6 实验时间 三天 7 实验分析项目和方法 (1)酵母镜检; (2)酵母浓度测定(湿重法):吸取5ml菌液,2500rpm离心5min,去上清液,称量菌体湿重 (3)发酵活力的测定 8 实验报告内容和数据处理 9 实验结果和讨论 。 补充:5升发酵罐可用玻璃器皿代替,

3. 培养基自动定量灌装机

一般6个月省人工。

现在一般用一次性无菌预灌装成品表面培养皿板,有90mm和55mm普通规格,也可以根据需要定制,目前做的比较好的品牌是青岛日水的一次性无菌培养皿;保质期一般能控制在6个月。这种一次性平板培养基使用也是非常便捷,目前被广大药厂实验室人员所认可。如果是用玻璃的一次性平板培养基,工作量大,如果人员少天天刷培养皿也确实挺累的。

另外,使用一次性塑料培养皿的好处: 实验室用玻璃培养皿虽然能够重复利用,但是需要刷版、晾干、灭菌、搬运等工序,并且破损率高,使得费用很高。改用一次性塑料培养皿的好处就显而易见了。改用一次性塑料培养皿,可减少企业人工成本,节约企业费用,降低工人劳动强度,提高检验准确度。

4. 预灌装培养基

24个月,

ISO14644 对已安装HEPA的泄漏检测,建议的最长时间间隔为24个月。

FDA在无菌药品生产指南中建议对于无菌制剂生产车间每半年进行一次检漏,我国在GMP 检查指南中建议通常一年一次。DOP检漏在HEPA 安装或更换后都应进行。苏信净化友情提醒,当环境监测显示空气质量恶化、或当产品无菌试验不合格、培养基模拟灌装试验失败时,都可作为偏差调查的一部分进行检漏。需进行检漏试验的滤器还包括烘干隧道和干烤箱所使用的HEPA。

5. 无菌模拟灌装培养基总结

1、小量发酵种子液

2、灌装培养基

3、发酵罐中加入种子液发酵

4、检测OD、溶氧量等指标

5、流加培养基、搅拌

6、发酵到对数生长期中后,进行诱导

7、诱导表达一段时间,放罐 具体请参见《生物反应工程》《发酵工艺》

6. 培养基模拟灌装指南2018

罐装润唇膏可以使用唇刷或者无名指涂抹,涂抹后尽量在5分钟内擦掉。一定要注意卫生,否则,唇膏就成了细菌的培养基了。如果用刷子,必须经常对刷子进行清洗。不能过量使用小蓝罐唇膏、避免长期使用小蓝罐唇膏、孕妇避免使用。使用小蓝罐唇膏建议一天最好不要超过4次,因为是药用唇膏也不建议长期使用。

7. 培养基自动灌装机的染菌概率

不能

因为若是作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶。

最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶。否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。

分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。

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