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蛋白质检测的方法(蛋白质检测的方法有几种)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-17 15:44   点击:272  编辑:admin   手机版

1. 蛋白质检测的方法有几种

蛋白质印迹(免疫印迹试验)即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息

蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981所著《析物化》(Analytical Biochemistry)首称Western Blot蛋白免疫印迹(Western Blot)电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

2. 蛋白质检测的方法有几种呢

尿蛋白检查分随意检查、8小时检查和24小时检查。如果是随意尿微量蛋白检查,可以在任何时间留取尿液标本,在2小时内送检。留晨起第二次小便{},尿常规检查时,留取尿液不少于10毫升。要求女性留取尿标本时应避开经期,以防止阴道分泌物混入尿液中。影响检查结果留取中段尿。

3. 蛋白质的测定有几种方法

要检验还用到质量分数为0.1 g/mL氢氧化钠溶液(A)和质量分数为0.01 g/mL硫酸铜溶液(B)先将土豆研磨后加入水制成土豆组织样液,在其中加入A2ml,摇荡均后加入双缩脲试剂B1ml,摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。其实市场上卖的土豆有两种 一中有点透明,吃起来脆,另一中颜色深些,吃起来面些前者是转基因的,增加了土豆中的蛋白质含量,但不那么好吃后者是传统土豆,好吃些,但是没多少蛋白质,营养不高

4. 蛋白质检测方法有哪些

蛋白质是荷兰科学家格利特·马尔德在1838年发现的。

他观察到有生命的东西离开了蛋白质就不能生存。蛋白质是生物体内一种极重要的高分子有机物,占人体干重的54%。蛋白质主要由氨基酸组成,因氨基酸的组合排列不同而组成各种类型的蛋白质。人体中估计有10万种以上的蛋白质。生命是物质运动的高级形式,这种运动方式是通过蛋白质来实现的,所以蛋白质有极其重要的生物学意义。人体的生长、发育、运动、遗传、繁殖等一切生命活动都离不开蛋白质。生命运动需要蛋白质,也离不开蛋白质。1845年由一位内科医生兼化学病理学家HenryBenceJones首次描述了这种蛋白,为单克隆游离免疫球蛋白轻链(病理状态下,轻链合成过多,则游离于血清中)。蛋白质肿瘤标志是最早发现的标志物。如β2微球蛋白、免疫球蛋白。一般来讲这类标志物特异性稍差,但检测方法相对比较容易,常作常规检测项目。

5. 蛋白质检测的方法有几种类型

超氧化物歧化酶(SOD)的催化底物是O2,一般多以一定时间内产物生成量或底物的消耗量作为酶活性单位。由于O2自身很不稳定,且不易制备,测定SOD的方法除少数采用直接法外,一般多为间接法。1.直接法原理是根据O2或产生O2的物质本身的性质测定O2的歧化量,从而确定SOD的活性。经典的直接法包括:脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法(EPR)、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵,一般较少应用。2.一般化学法这些方法的共同特点是要有一个O2的产生体系和一个被O2还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下,一部分O2被SOD歧化,因而O2还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度,测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。常用的有:⑴邻苯三酚自氧化法:即改良Marklund法。原理是基于经典的分光光度法,在碱性条件下,邻苯三酚自氧化成红桔酚,用紫外-可见光谱跟踪波长为325nm、420nm或650nm(经典为420nm),同时产生O2,SOD催化O2发生歧化反应从而抑制邻苯三酚的自氧化,样品对邻苯三酚自氧化速率的抑制率,可反映样品中的SOD含量。本法具有特异性强,所需样本量少(仅50μl),操作快速简单,重复性好,灵敏度高,试剂简单等优点。⑵细胞色素C还原法(McCord法):原理是黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中产生的O2使一定量的氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C,后者在550nm有最大光吸收。在SOD存在时,由于一部分O2被SOD催化而歧化,O2还原细胞色素C的反应速度则相应减少,即其反应受到抑制。将抑制反应的百分数与SOD浓度作图可得到抑制曲线,由此计算样品中SOD活性。本法是间接法中的经典方法,但本法灵敏度较低。3.化学发光法原理是黄嘌呤氧化酶在有氧条件下,催化底物黄嘌呤或次黄嘌呤发生氧化反应生成尿酸,同时产生O2。后者可与化学发光剂鲁米诺反应,使其产生激发。SOD能清除O2从而抑制鲁米诺的化学发光。本法可应用于SOD的微量测定,不仅灵敏度高,简便易行,而且特异性与准确性至少与细胞色素C还原法类似。4.免疫学方法上述方法测定的是SOD活性,免疫学方法则可测定样品中SOD的质量,因此特异性较好,是较理想的测定SOD方法,免疫法有放射免疫法、化学发光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能测定抗体相应的抗原,对于检测不同种类的SOD,则须制备相应的特异性抗体,手续繁琐。5.电泳法电泳染色定位法的基本原理是根据光化学法与NBT还原法。电泳则采取垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。既可采用SOD活性正染色(呈现棕色区带)也可采取SOD活性负染色(呈现无色透明区带)。根据凝胶上电泳分离的SOD区带的着色深浅与面积大小,对样品进行半定量分析,也可制作校正曲线计算样品中的SOD含量。染色定位法常用于鉴定SOD,很少为了定量,主要原因是它不及化学法简便,但鉴定SOD却较化学法为优。用电泳法可鉴定SOD是否掺有杂质蛋白,有无同工酶,且可半定量地确定SOD的活性大小。6.平行放在距20W荧光灯管3cm处的光照台上,光照8min后,立即在200A分光光度计的460nm波长下比色。用测得的结果计算样品中的SOD含量..

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