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用什么检测蛋白质(蛋白质测定)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-20 08:07   点击:110  编辑:admin   手机版

1. 蛋白质测定

定量检查,是相对于定性检查来说的。医学检验中,检测分为定量检测、定性检测。定性检测,是指检测的这个标本中是否有某种特定的物质,如果有就是阳性,没有就是阴性。比如检测乙肝表面抗原就是定性检测,结果会报阳性、阴性。

尿常规中的尿蛋白检测,也是定性检测,结果会报阳性、阴性。

而定量检测,则是要检测出标本中所含有的某一特定物质具体的量,通过量的多少来判断是否有异常。

例如血常规中的血红蛋白浓度,就是定量检测,如果低于120g/L,可能是有贫血的情况。

转氨酶的检测也是定量的检测,是肝功能的指标,如果升高,提示有肝脏损伤。

2. 蛋白质测定时蒸馏应该加入过量氢氧化钠

1加入氢氧化钠是因为氢氧化钠和硫酸铵在加热条件下生成氨气溢出。

2加入量需要过量,估计样品氮含量,计算所需量,加入量最少超过所需量,还要中和消解过程中未分解的硫酸一般是1.5倍+消解时加入的硫酸量

3溶液颜色变化,如果本来是澄清溶液,此后会变黑、褐灰等颜色

4颜色变化是铜离子的存在的原因,变黑是铜离子和氢氧根离子变成氢氧化铜。不稳定生成氧化铜(黑色)所致

5如果没有变化,是加人氢氧化钠量不够所致

以上内容又本人经验所得,没有参考任何文献,希望对楼主有所帮助!

3. 蛋白质含量检测方法

●方法:平板等电聚焦

●原理:蛋白质分子在含有载体两性电介质形成的连续而稳定的线性pH梯度中进行电泳。但不自是按照等电点不同被分离。

●仪器:Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell

●样品要求:

●液体:浓度>3mg/ml;体积>200ul;固体:质量>200ug

●样品纯度>90%;含盐量<3 0mM;分子量:一般要求大于1000Da

●常见影响测试情况:

1、蛋白质纯度不足

2、含盐量过高

3、蛋白质分子量太小,导致无法固定染色

4. 蛋白质测定仪

1、在使用仪器之前,首先将记录仪(色谱工作站)、自动部分收集器、恒流泵以及层析柱等所需配套仪器连接好,接好各类插头与插座(220V电源)。

  2、将检测仪电源开关ON按下,如果电源指示灯亮了,那么表示仪器电源开始工作了,之后对光源指示灯进行观察,如果光源指示灯亮了,那么说明光源已经开始工作,仪器能够进入到工作状态,旋转检测仪波长旋钮旋到所需波长刻度位置,拨量程旋钮到1%档(先将仪器预热20min,然后等到基线平直以后就能够进行加样测试)。

  3、将记录仪电源开关接通,拨动电源开关使指示灯亮。纸速度能够通过记录仪说明书进行调节,用户按照需求自行掌握,用10mV档进行测量。这时,记录仪指针由零点开始向右移动某一刻度,对检测仪光量”旋钮进行调节,使指针在记录仪大约中间位置5mV左右数字停留。

  4、在恒流泵上接上检测仪进样口聚乙烯塑料,在检测仪流过凝胶层析柱中缓冲液(1-3ml/min为恒流泵流量视凝胶层析柱大小),将吸光度A值使用调零调整为0

  5、完成上述步骤之后,析系统平衡之后就能够开始使用洗脱液对样品进行洗脱,再一次调吸光度0点在洗脱前。不能够再在洗脱过程完成之前对0旋钮进行调节。当洗脱液从检测仪流过的时候,大于零的数值为吸光度显示,随着样品的浓度的变化,吸光度数值大小也会发生改变。结束洗脱后,稍大于零的数值为吸光度显示。

  6、记录仪自动绘制吸光度图谱以及数字显示吸光度这两个检测系统之间是互相独立的。蛋白检测仪器所绘峰值大小与数字显示吸光度不能够互相换算,没有直接的关系。

  7、结束测试之后,必须将电源切断,并且将聚乙烯塑料管和样品池用蒸馏水进行清洗。

5. 蛋白质测定凯氏定氮法

食品中蛋白质的测定方法

本标准适用于各类食品中蛋白质的测定.

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数

6. 蛋白质测定的方法

可以用凯式定氮法~这个是我们在化验室做的具体步骤,挺麻烦,如果没接触过,应该看不明白吧?!

1:把大豆用粉碎机粉碎,取3-5g于已经称量好的皿盒中,在120度的烘箱中烘30分钟。拿出等待凉后称重,减去皿盒重量,除以大豆质量,再减1,即为水分的百分比。

这个要记下来2:称取0.2g硫酸铜,6g硫酸钾,把0.5g粉碎好的大豆(不用测量水分的)用滤纸包好放入定氮瓶中中,加20ml硫酸,(瓶口上放一个小漏斗,防止蛋白跑掉)小火在电炉子上消化,等没有碳化颗粒,并处于澄清状态时,拿下来凉一会。再加过氧化氢直到把瓶颈上的蛋白冲洗干净为止,再消化30分钟。拿下来,等凉。

3:此时为蓝色液体,凉透后,用蒸馏水洗出,放入100ml的容量瓶中。等凉透后,用蒸馏水定容。

4:吸10ml硼酸,两滴指示剂,放在管头,管头在页面一下。

:5:用移液管吸15m溶液(用前润洗),放入定氮器中,用蒸馏水冲洗壁,盖上塞子。打开电源等水沸腾时蒸十分钟,十分钟后把管头放在三角瓶壁上一分钟。

6:最后用硫酸滴定,直到无色即可。记下滴定硫酸的毫升数计算公式A:(滴定毫升数-空白)*0.014*硫酸浓度*5.71/大豆质量B:1-水分最后蛋白含量公式=A/B

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