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蛋白质含量在线检测方法(蛋白质含量测定方法)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-20 08:25   点击:256  编辑:admin   手机版

1. 蛋白质含量测定方法

24小时尿蛋白定量是检测24小时消化后尿蛋白含量。具体方法是用干净的痰盂或容器收集24小时的尿液总量,最好从早上8点到明天早上8点。然后把所有的尿液送到实验室检查蛋白质含量。在正常情况下,蛋白质含量可能少于50毫克。如果超过50毫克,则认为蛋白质含量增加。需要进一步检查肾功能,并用肾彩超确定是否有肾脏疾病。

2. 蛋白质含量测定的方法

仪器有分光光度计 台式离心机 精密天平 三角瓶 烧杯 量筒 移液器

Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。

此法的显色原理与双缩脲法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比。

3. 蛋白质的测定

可以用凯式定氮法~这个是我们在化验室做的具体步骤,挺麻烦,如果没接触过,应该看不明白吧?!

1:把大豆用粉碎机粉碎,取3-5g于已经称量好的皿盒中,在120度的烘箱中烘30分钟。拿出等待凉后称重,减去皿盒重量,除以大豆质量,再减1,即为水分的百分比。

这个要记下来2:称取0.2g硫酸铜,6g硫酸钾,把0.5g粉碎好的大豆(不用测量水分的)用滤纸包好放入定氮瓶中中,加20ml硫酸,(瓶口上放一个小漏斗,防止蛋白跑掉)小火在电炉子上消化,等没有碳化颗粒,并处于澄清状态时,拿下来凉一会。再加过氧化氢直到把瓶颈上的蛋白冲洗干净为止,再消化30分钟。拿下来,等凉。

3:此时为蓝色液体,凉透后,用蒸馏水洗出,放入100ml的容量瓶中。等凉透后,用蒸馏水定容。

4:吸10ml硼酸,两滴指示剂,放在管头,管头在页面一下。

:5:用移液管吸15m溶液(用前润洗),放入定氮器中,用蒸馏水冲洗壁,盖上塞子。打开电源等水沸腾时蒸十分钟,十分钟后把管头放在三角瓶壁上一分钟。

6:最后用硫酸滴定,直到无色即可。记下滴定硫酸的毫升数计算公式A:(滴定毫升数-空白)*0.014*硫酸浓度*5.71/大豆质量B:1-水分最后蛋白含量公式=A/B

4. 蛋白质的检验方法

尿蛋白检查分随意检查、8小时检查和24小时检查。如果是随意尿微量蛋白检查,可以在任何时间留取尿液标本,在2小时内送检。留晨起第二次小便{},尿常规检查时,留取尿液不少于10毫升。要求女性留取尿标本时应避开经期,以防止阴道分泌物混入尿液中。影响检查结果留取中段尿。

5. 测定蛋白质

蛋白质印迹(免疫印迹试验)即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息

蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981所著《析物化》(Analytical Biochemistry)首称Western Blot蛋白免疫印迹(Western Blot)电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

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