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酶标仪测蛋白浓度(酶标仪测蛋白浓度原理)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-20 19:25   点击:266  编辑:admin   手机版

1. 酶标仪测蛋白浓度原理

OD值是光密度的缩写,也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱,来鉴别物质或者测定物质的含量,也就是将一束特定波长的光通过被检测物,被检测物可以将光吸收掉一部分,通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高,吸光度的值就会越高。临床使用这种分光光度法来检测很多物质,比如可以检测乙肝表面抗原这种蛋白质。

2. 酶标仪蛋白定量

酶标仪原理是使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。

在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。

加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

3. 酶标仪测蛋白波长

chac化学名称叫人胆碱乙酰化酶,他是化学实验试剂。

人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人胆碱乙酰化酶(CHAc)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人胆碱乙酰化酶(CHAc)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

4. 酶标仪测蛋白浓度原理图

在建立某一ELISA测定中,应对包被抗原或抗体的浓度和酶标抗原或抗体的浓度予以选择,以达到最合适的测定条件和节省测定费用。

5. 酶标仪测定原理

酶标仪就是一台变相的光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计几乎相同。 FC酶标仪所用的单色光既可通过相干滤光片来获得,也可用分光光度计相同的单色器来得到。

在使用滤光片作滤波装置时与普通比色计一样,滤光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的。

光源灯发出的光经聚光镜,光栏后到达反射镜,经反射镜作90°反射后垂直通过比色溶液,然后再经滤光片送到光电管。

6. 酶蛋白浓度测定

CK 活性计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按组织蛋白含量计算

酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/mg prot)=△A÷e÷d×V 反总÷(V 样×Cpr)= 804×△A÷Cpr

(2)按组织样本质量计算:

酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/g)=△A÷e÷d×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 804×△A÷W

(3)按血清计算:

酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK 活性(nmol/min/L)=△A÷e÷d×V 反总÷V 样×1000= 804000×△A

e:NADPH 微摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,

0.3mL;V 样:反应体系中样本体积,0.06mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,

测定原理:

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6- 磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP

+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸

馏水。

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