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质谱检测蛋白(蛋白质检测)

来源:www.haichao.net  时间:2023-01-22 07:44   点击:181  编辑:admin   手机版

1. 蛋白质检测

WB实验的基本原理:

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光,显影,定影

(八)凝胶图象分析

2. 蛋白质检测的具体操作

尿蛋白检查分随意检查、8小时检查和24小时检查。如果是随意尿微量蛋白检查,可以在任何时间留取尿液标本,在2小时内送检。留晨起第二次小便{},尿常规检查时,留取尿液不少于10毫升。要求女性留取尿标本时应避开经期,以防止阴道分泌物混入尿液中。影响检查结果留取中段尿。

3. 蛋白质检测双缩脲试剂

双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液; 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。如果混合加入,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的 浓度加大几十倍,如果两者的浓度与蛋白质能产生明显的反应的剂量下,是没有什么影响的

4. 蛋白质检测用什么试剂

蛋白质用双缩尿试剂

主要是Cu2+在碱性环境中氧化

蛋白质中的醛基变成砖红色的氧化亚铜

二苯胺与DNA反应

原理是:DNA在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。

5. 蛋白质检测为什么先加A再加B

你看看反应步骤试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL,摇匀→加双缩尿试剂B液4滴,摇匀→观察颜色变化(紫色)B液4滴是少量的。如果先加B在加A,没有等到营造完碱性环境,就直接生成的氢氧化铜沉淀了。

6. 蛋白质检测a液是什么

C a是cancer(癌症,肿瘤)的缩写,中文叫甲胎蛋白,是一种诊断肝癌的特异性指标

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